Automne 1999
Réunion GEHT

Séance consacrée à l’expression de l’évaluation des glycoprotéines plaquettaires à la surface plaquettaire et à l’étude de l’activation plaquettaire.

En préambule à cette séance, Françoise Dignat-George fait le point sur les études des microparticules par cytométrie en flux :
Après avoir testé différentes approches d’évaluation des microparticules, les résultats les plus homogènes entre les différents centres d’investigation ont été obtenus par analyse directe sur sang total avec des anticorps anti-GP IIb-IIIa directement conjugués à un fluorochrome. Les paramètres à utiliser respectivement sur les cytomètres Becton Dickinson et Coulter, afin de définir les zones correspondant aux microparticules et prévus à l’occasion de cette réunion, sont maintenant définis et indiqués sur le nouveau protocole (voir sur le site GEHT).
Il est proposé aux différents groupes impliqués dans cette étude, une évaluation des microparticules présentes chez des sujets témoins et chez des patients présentant des pathologies pour lesquelles une élévation de leur taux a déjà été décrite.

Les communications comportent trois volets.

D’abord Bruno Gauthier (UMR 5533 CNRS, Pessac) détaille les technologies utilisées pour la détection de plaquettes activées dans la circulation et l’étude de l’activation plaquettaire. La méthodologie de détection des plaquettes activées est décrite ci-après. Le consensus est obtenu sur les analyses sur sang total. Le sang est prélevé sur tubes vacutainers. Les participants utilisent des prélèvements sur citrate de soude ou ACD-A. Nous n’avons pas constaté de supériorité dans l’utilisation de l’ACD-A. La détection de plaquettes activées doit comporter la recherche d’épitopes reflétant l’activation du complexe GP IIb-IIIa et la présence d’une sécrétion plaquettaire, par l’étude par exemple de la P-sélectine à la surface plaquettaire. Unanimement, le délai d’analyse est fixé à 4 heures après le prélèvement. Des exemples d’activation plaquettaire dans des pathologies cardio-vasculaires ont été présentés.

Cette communication est suivie de la présentation par M-C Hurtaud-Roux, de l’équipe de Nicole Schlegel, sur les résultats d’investigations dans les pathologies plaquettaires congénitales en utilisant les trousses de cytométrie en flux Cytoquant (Diagnostica Stago). Les résultats montrent les capacités de cette technologie à diagnostiquer le syndrome de thrombasthénie de Glanzmann. Un avantage, en particulier pour la pédiatrie, est le faible volume de sang nécessaire pour ce type d’examen.

Enfin, la troisième présentation par Nathalie Hézard, de l’équipe de Gérard Potron, comporte une analyse des complexes GP IIb-IIIa résiduels fonctionnels lors d’utilisation d’anti-GP IIb-IIIa de type abciximab comme thérapeutique anti-agrégante en pathologie cardio-vasculaire. Les réactifs utilisés sont les trousses fournies par ByoCytex " GP IIb-IIIa occupancy " qui comportent un anticorps anti-GP IIb-IIIa se fixant sur le complexe GP IIb-IIIa, même en présence d’anticorps de type c7E3, et un autre anticorps ne se fixant que sur les complexes GP IIb-IIIa n’ayant pas fixé le c7E3. Une étude en parallèle avec l’agrégation plaquettaire a permis de confirmer que l’inhibition de l’agrégation plaquettaire nécessitait un blocage d’environ 80% des sites de GP IIb-IIIa. De plus lorsque le blocage du nombre de sites diminue (50 à 60 %) une correction partielle de l’agrégation plaquettaire est observée. Ce système valable pour évaluer l’inhibition du c7E3 ou abciximab ne l’est pas forcément pour les autres anti-GP IIb-IIIa dont l’inhibition résulte de molécules dont le site de fixation n’est peut ne pas être compétitif avec l’anticorps présent dans les trousses.
Nous proposons de tester, dans un premier temps, les trousses de Cytoquant gracieusement offertes par la Société Diagnostica Stago dans plusieurs centres et d’évaluer l’homogénéité des résultats.
Pour ceux d’entre vous qui souhaiteraient participer à l’étude multicentrique et effectuer cette évaluation pour le 30 mars 2000 au plus tard, vous pouvez m’envoyer votre demande de manière à recevoir tous le même lot de trousses. Dès que nous aurons les résultats de cette première série, nous pourrons tester d’autres trousses en particulier celles qui sont proposées par la Société BioCytex.
Nous avons décrit le protocole de détection des plaquettes activées présenté par Bruno Gauthier. Il serait opportun de tester, pour les mêmes témoins que ceux utilisés pour tester les trousses commercialisées, la fixation de PAC-1 et la fixation d’un anticorps de votre choix anti-P-Sélectine en suivant le protocole proposé. Ce protocole sera suivi d’un protocole d’évaluation de l’activation plaquettaire.