Avril 2000
GEHT de Reims

Durant cet atelier les trois thématiques du groupe de travail ont été abordées :

• Etude des glycoprotéines plaquettaires
  
  
• Etude des microparticules plaquettaires
  
  
• Etude des plaquettes réticulées

1) Etude des glycoprotéines plaquettaires

B. Gauthier (UMR 5533, Pessac) a présenté les premiers résultats concernant l'étude multicentrique sur la quantification des glycoprotéines plaquettaires en CMF. Cette étude a été réalisée avec les trousses Cytoquant distribuées gracieusement par la société DIAGNOSTICA STAGO. Dix laboratoires participent à cette évaluation ce qui a permis une analyse sur 54 témoins. Les résultats obtenus sont très encourageants.

Pour les complexes GP IIb-IIIa et GP Ib-IX-V, les résultats obtenus sur les plaquettes non activées sont très homogènes entre les centres. Un consensus s'est dégagé sur l'utilisation de la moyenne géométrique pour le calcul des intensités moyennes de fluorescence. En utilisant cette moyenne, on obtient par plaquettes pour le complexe GP IIb-IIIa 52 629 sites +/- 9 464 avec l'anticorps dirigé contre le complexe et 54 304 sites +/- 9172 avec l'anticorps anti-GP IIIa, pour le complexe GP Ib-IX-V on obtient 32 151 sites +/- 4 489.

Par contre on observe une variabilité beaucoup plus importante sur les plaquettes activées faisant suspecter des techniques d'activation différentes. Concernant ce dernier point, une étude de la méthode d'activation devrait être discutée et de nouveaux essais devront être effectués.

Les résultats concernant la P-sélectine sont sur les plaquettes non stimulées beaucoup plus dispersés. Le nombre de sites étant inférieur à 1 000 par plaquettes, les valeurs obtenues dans cette gamme sont peut-être dépendantes du type de cytomètres en flux utilisés et les limites de quantification du Kit sont peut-être atteintes. Ces hypothèses doivent être évaluées et discutées avec les industriels.

En ce qui concerne la praticabilité de la trousse, peu de problèmes ont été rencontrés. Ponctuellement une lyse partielle ou totale des éléments figurés du sang est apparue. Ce problème a fait l'objet d'une communication de V. Lefranc (Hôpital Robert Debré, Service d'hématologie Biologique, Paris) qui implique le fixateur, la paraformaldéhyde. Ce problème associé à la plus grande proximité des cytomètres en flux des laboratoires d'hémostase a conduit le GEHT à proposer aux industriels (DIAGNOSTICA STAGO et BIOCYTEX) de nous fournir des protocoles sans fixateur, et de vérifier la bonne reproductibilité des résultats sur les échantillons non fixés.

2) Etude des microparticules plaquettaires

F. Dignat-George (Laboratoire d'Hémato Immuno, Faculté de Pharmacie, Marseille) a présenté la quatrième phase de l'étude des microparticules plaquettaires où les différentes équipes devaient en fonction des protocoles donnés sur le site du GEHT, évalués les taux de microparticules chez des témoins et chez des patients présentant des pathologies déterminées. La méthode proposée sur sang total donne les meilleurs résultats aussi c'est celle qui est maintenant retenue.

Toutefois, un fait marquant est la différence importante qui existe entre les centres. Cette différence ne semble pas liée aux protocoles utilisés pour calculer les taux de microparticules (Billes calibrées ou plaquettes en standard interne) mais aux types de cytomètres (Réglages différents .) et nous souhaitons comprendre avec l'aide des industriels concernés son origine. Pour palier à cette difficulté, F. Dignat-George propose l'utilisation d'un ratio (taux malade / taux moyen témoin), les valeurs normales se trouvant dans l'intervalle taux moyen témoin +/- 1 ou 2 SD divisé par taux moyen. Les résultats obtenus avec ce calcul permettent des comparaisons entre les différents centres en s'affranchissant des problèmes d'appareillages.

En ce qui concerne les résultats obtenus chez les malades, une différence avec les valeurs normales est retrouvée chez les patients diabétiques quel que soit le type d'appareil. Chez les patients coronariens devant subir une angioplastie, aucune différence n'est observée avant et après l'acte chirurgical et les taux obtenus avant l'intervention sont sensiblement identiques aux valeurs témoins.

D'un point de vue technique, l'utilisation de billes calibrées permettrait une meilleure standardisation des mesures entre laboratoire, mais plusieurs centres avaient rencontré des difficultés en utilisant des billes calibrées de la société Coulter sur des cytomètres BD et réciproquement. Cependant après discussion avec les industriels, ce problème devrait pouvoir être régler.

Dans une prochaine phase, F. Dignat-George propose d'évaluer une nouvelle approche consistant à rechercher les microparticules présentes à la surface de cellules comme les globules blancs.

3) Etude des plaquettes réticulées

Dans cette troisième partie très courte compte tenu de l'heure, Jean-François Schved (Hôpital Saint Eloi, Laboratoire Central d'Hématologie, Montpellier) nous a présenté les résultats concernant la détermination du taux de plaquettes réticulées dans les thrombopénies. Les résultats montrent une nette élévation du % de plaquettes réticulées dans les thrombopénies périphériques.

Le protocole réactualisé va être proposé dans les jours suivants sur le site du GEHT.